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結(jié)合科譽(yù)興業(yè)BioSpaceX-3D的設(shè)備特性,可通過設(shè)備功能調(diào)控、實(shí)驗(yàn)方案優(yōu)化雙維度實(shí)現(xiàn)微重力下細(xì)胞團(tuán)聚的高效分散,具體方法如下:
1. 利用設(shè)備專屬參數(shù)調(diào)節(jié)
借助儀器的45°傾斜旋轉(zhuǎn)功能,將轉(zhuǎn)速精準(zhǔn)調(diào)控至5-20rpm區(qū)間,通過整機(jī)三維旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的溫和流體剪切力,打破初期細(xì)胞簇并維持單細(xì)胞/小聚集體懸浮狀態(tài);同時(shí)可利用其精準(zhǔn)重力模擬能力,微調(diào)重力場(chǎng)至適配區(qū)間(如10?2g-0.1g),減少重力沉降導(dǎo)致的細(xì)胞抱團(tuán),且該轉(zhuǎn)速與重力調(diào)節(jié)不會(huì)產(chǎn)生高剪切力損傷細(xì)胞。
2. 配套實(shí)驗(yàn)流程優(yōu)化
- 接種前預(yù)處理:用胰酶+0.02%EDTA混合液輕柔消化細(xì)胞團(tuán),制備單細(xì)胞懸液,若為難分散細(xì)胞可搭配低密度傳代預(yù)培養(yǎng);同時(shí)利用儀器可放入CO?培養(yǎng)箱的特性,全程維持37℃、5%CO?的穩(wěn)定環(huán)境,避免細(xì)胞應(yīng)激性團(tuán)聚。
- 培養(yǎng)基定制適配:在培養(yǎng)基中添加0.1%-0.5%甲基纖維素等抗團(tuán)聚劑,結(jié)合設(shè)備耗材可定制的優(yōu)勢(shì),選用防粘附夾具/培養(yǎng)皿,降低細(xì)胞與容器、細(xì)胞間的粘連;若存在DNA介導(dǎo)的細(xì)胞聚集,可在培養(yǎng)基中加入低濃度DNA酶I(需控制用量避免細(xì)胞突變)。
- 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與動(dòng)態(tài)調(diào)整:通過設(shè)備WIFI互聯(lián)的實(shí)時(shí)重力監(jiān)測(cè)功能,同步觀察培養(yǎng)體系內(nèi)重力數(shù)值變化,若發(fā)現(xiàn)團(tuán)聚趨勢(shì)可及時(shí)微調(diào)旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速或重力參數(shù),同時(shí)定期更換1/3培養(yǎng)基清除代謝廢物,從環(huán)境層面抑制細(xì)胞聚集。
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